Kit RNAprep Pure Cell / Bacteria
Características
■ Los tampones y protocolos optimizados para células cultivadas y muestras de bacterias hacen que el proceso sea simple y conveniente.
■ La DNasa I única minimiza la contaminación del ADN genómico.
■ Columnas de filtración exclusivas sin RNasa CS que eliminan otras contaminaciones.
■ El ARN de alta pureza y listo para usar es adecuado para aplicaciones sensibles posteriores.
■ No se necesita extracción de fenol / cloroformo, ni precipitación de LiCl y etanol, ni centrifugación en gradiente de CsCl, lo que hace que el proceso sea seguro y confiable.
Aplicaciones
■ RT-PCR.
■ Northern Blot, Dot Blot.
■ PCR en tiempo real.
■ Análisis de viruta.
■ Detección de poliA, traducción in vitro, análisis de protección de ARNasa y clonación molecular.
Todos los productos se pueden personalizar para ODM / OEM. Para detalles,haga clic en Servicio personalizado (ODM / OEM)
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Material: células Jurkat humanas (1 × 106 ) Método: El ARN total de células Jukat humanas se aisló usando el kit RNAprep Pure Cell / Bacteria. Resultados: Consulte la imagen de electroforesis en gel de agarosa anterior. Se cargaron 2-4 µl de 50 µl de eluidos por carril. La electroforesis se realizó a 6 V / cm durante 30 min en gel de agarosa al 1%. |
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Material: TOP10 E. coli (1 × 108) Método: El ARN total de TOP10 E. coli se aisló usando el kit RNAprep Pure Cell / Bacteria. Resultados: Consulte la imagen de electroforesis en gel de agarosa anterior. Se cargaron 2-4 µl de 50 µl de eluidos por carril. La electroforesis se realizó a 6 V / cm durante 30 min en gel de agarosa al 1%. |
La lisis u homogeneización celular A-1 no es suficiente
---- Reduzca el uso de muestras, aumente la cantidad de tampón de lisis, aumente el tiempo de homogeneización y lisis.
A-2 La cantidad de muestra es demasiado grande
---- Reduzca la cantidad de muestra utilizada o aumente la cantidad de tampón de lisis.
A-1 Lisis u homogeneización celular insuficiente
---- Reduzca el uso de muestras, aumente la cantidad de tampón de lisis, aumente el tiempo de homogeneización y lisis.
A-2 La cantidad de muestra es demasiado grande
---- Consulte la capacidad máxima de procesamiento.
El ARN A-3 no se eluye completamente de la columna.
---- Después de agregar agua libre de ARNasa, déjela por unos minutos antes de centrifugar.
A-4 Etanol en el eluyente
---- Después del enjuague, centrifugue nuevamente y retire el tampón de lavado tanto como sea posible.
El medio de cultivo celular A-5 no se elimina por completo
---- Al recolectar células, asegúrese de eliminar el medio de cultivo tanto como sea posible.
A-6 Las células almacenadas en RNAstore no se centrifugan eficazmente
---- La densidad de almacenamiento de ARN es mayor que el medio de cultivo celular promedio; por lo que debe aumentarse la fuerza centrífuga. Se sugiere centrifugar a 3000x g.
A-7 Bajo contenido de ARN y abundancia en la muestra
---- Utilice una muestra positiva para determinar si el bajo rendimiento es causado por la muestra.
A-1 El material no es fresco
---- Los tejidos frescos deben almacenarse en nitrógeno líquido inmediatamente o colocarse inmediatamente en el reactivo RNAstore para asegurar el efecto de extracción.
A-2 La cantidad de muestra es demasiado grande
---- Reducir la cantidad de muestra.
Contaminación por ARNasa A-3n
---- Aunque el tampón provisto en el kit no contiene RNasa, es fácil contaminar la RNasa durante el proceso de extracción y debe manipularse con cuidado.
A-4 Contaminación por electroforesis
---- Reemplace el tampón de electroforesis y asegúrese de que los consumibles y el tampón de carga estén libres de contaminación por ARNasa.
A-5 Demasiada carga para electroforesis
---- Reduzca la cantidad de carga de muestra, la carga de cada pocillo no debe exceder los 2 μg.
A-1 La cantidad de muestra es demasiado grande
---- Reducir la cantidad de muestra.
A-2 Algunas muestras tienen un alto contenido de ADN y pueden tratarse con DNasa.
---- Realice un tratamiento con ADNasa sin ARNasa en la solución de ARN obtenida, y el ARN se puede usar directamente para experimentos posteriores después del tratamiento, o se puede purificar aún más mediante kits de purificación de ARN.
Para cristalería, horneado a 150 ° C durante 4 h. Para recipientes de plástico, sumergir en 0,5 M NaOH durante 10 min, luego enjuagar bien con agua libre de ARNasa y luego esterilizar para eliminar por completo la ARNasa. Los reactivos o soluciones utilizados en el experimento, especialmente el agua, deben estar libres de RNasa. Utilice agua libre de ARNasa para todas las preparaciones de reactivos (agregue agua a una botella de vidrio limpia, agregue DEPC a una concentración final de 0.1% (V / V), agite durante la noche y esterilice en autoclave).
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