2 × Taq Plus PCR Mix

ADN polimerasa Taq ultrapura, de alta eficiencia y alta fidelidad.

Taq Plus DNA Polymerase es una mezcla de Taq y Pfu DNA polimerasa. Tiene actividad de exonucleasa 5'-3 'y actividad de exonucleasa 3'-5', con las características de alta eficiencia de amplificación y baja tasa de desajuste. En comparación con la ADN polimerasa Taq, la ADN polimerasa Taq Plus tiene las ventajas de una mayor longitud de amplificación (las plantillas simples se pueden amplificar eficazmente hasta 20 kb y las plantillas complejas pueden ser de hasta 10 kb), buena fidelidad, etc. tiene las ventajas de una velocidad de amplificación rápida y una alta eficiencia de reacción.

Gato. No	Tamaño de embalaje
4992791	1 ml
4992792	5 * 1 ml
4992793	5 × 1 ml

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Detalle del producto

Ejemplo experimental

Preguntas más frecuentes

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Definición de actividad

1 Unidad (U) La actividad de la ADN polimerasa Taq Plus se define como la cantidad de enzima necesaria para incorporar 10 nmol de desoxinucleótidos en sustancias insolubles en ácido a 74 ° C en 30 minutos utilizando ADN de esperma de salmón activado como plantilla / cebador.

Control de calidad

La pureza por detección de SDS-PAGE es más del 99%; No se detecta actividad de nucleasa exógena; El gen de copia única en el genoma humano podría amplificarse eficazmente; No hay cambios de actividad significativos cuando se almacena a temperatura ambiente durante una semana.

Parámetros técnicos principales

La ADN polimerasa Taq Plus tiene actividad exonucleasa 5′-3 ′ y actividad exonucleasa 3′-5 ′. Los productos de PCR se pueden clonar directamente en el vector TA. Si es necesario mejorar la eficacia de la clonación, se recomienda purificar los productos de la PCR primero y realizar la cola A antes de la clonación en el vector TA.

Mezcla de PCR Taq Plus de un tubo (certificación nacional de productos de alta tecnología)

■ Taq Plus PCR Mix ha mejorado la especificidad y la sensibilidad de la reacción de PCR y puede amplificar plantillas complejas con alto contenido de GC, estructura secundaria y similares. Se pueden amplificar tan solo 2 copias de la plantilla objetivo, lo que garantiza resultados experimentales más precisos.

■ La fórmula única de Taq Plus PCR Mix hace que todo el sistema de reacción sea muy estable y la actividad no se verá afectada por la congelación-descongelación repetida o el almacenamiento prolongado a 4 ° C.

■ La solución de mezcla de PCR preparada previamente, estable y eficiente, puede hacer que la operación sea rápida y simple, reduciendo en gran medida la intensidad del trabajo y los errores de muestreo. El potenciador y optimizador de PCR de alto rendimiento también se incluyen en la mezcla, lo que reduce los requisitos en las condiciones de PCR.

■ Este producto tiene sistemas que contienen y sin colorantes. Los productos de mezcla de PCR que contienen colorantes se pueden someter a electroforesis directamente después de la PCR, sin añadir tampón de muestra.

Aplicaciones

Se utiliza comúnmente para la amplificación de plantillas con alta fidelidad y estructura compleja, como alto contenido de GC y estructura secundaria. En la mayoría de los casos, puede reemplazar la ADN polimerasa Taq.

Todos los productos se pueden personalizar para ODM / OEM. Para detalles,haga clic en Servicio personalizado (ODM / OEM)

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Utilice ADN genómico como plantilla para amplificar el fragmento de 1 kb.
Después de la reacción de PCR, tome 5 μl para la detección de electroforesis.

P: sin bandas de amplificación

Plantilla A-1

■ La plantilla contiene impurezas de proteínas o inhibidores de Taq, etc. —Purifique la plantilla de ADN, elimine las impurezas de proteínas o extraiga el ADN de la plantilla con kits de purificación.

■ La desnaturalización de la plantilla no es completa —— Aumente adecuadamente la temperatura de desnaturalización y prolongue el tiempo de desnaturalización.

■ Degradación de la plantilla: vuelva a preparar la plantilla.

Imprimación A-2

■ Mala calidad de los cebadores: vuelva a sintetizar el cebador.

■ Degradación de la imprimación: alícuota las imprimaciones de alta concentración en un volumen pequeño para su conservación. Evite la congelación y descongelación múltiples o criopreservados a 4 ° C a largo plazo.

■ Diseño inadecuado de los cebadores (por ejemplo, la longitud del cebador no es suficiente, se forma un dímero entre los cebadores, etc.) - Rediseñe los cebadores (evite la formación del dímero del cebador y la estructura secundaria)

A-3 Mg²⁺concentración

■ Mg²⁺ la concentración es demasiado baja —— Aumente adecuadamente el Mg²⁺concentración: Optimice el Mg²⁺ concentración mediante una serie de reacciones de 1 mM a 3 mM con un intervalo de 0,5 mM para determinar el Mg óptimo²⁺ concentración para cada plantilla y cebador.

A-4 Temperatura de recocido

■ La alta temperatura de recocido afecta la unión del cebador y la plantilla. ——Reducir la temperatura de recocido y optimizar la condición con un gradiente de 2 ° C.

A-5 Tiempo de extensión

■ Tiempo de extensión corto —— Aumente el tiempo de extensión.

P: falso positivo

Fenómenos: las muestras negativas también muestran las bandas de la secuencia objetivo.

A-1 Contaminación de PCR

■ Contaminación cruzada de la secuencia diana o los productos de amplificación —— Tenga cuidado de no pipetear la muestra que contiene la secuencia diana en la muestra negativa ni derramarla fuera del tubo de centrífuga. Los reactivos o el equipo deben esterilizarse en autoclave para eliminar los ácidos nucleicos existentes, y la existencia de contaminación debe determinarse mediante experimentos de control negativo.

■ Contaminación de los reactivos ——Aliquiar los reactivos y almacenar a baja temperatura.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ la concentración es demasiado baja —— Aumente adecuadamente el Mg²⁺ concentración: Optimice el Mg²⁺ concentración mediante una serie de reacciones de 1 mM a 3 mM con un intervalo de 0,5 mM para determinar el Mg óptimo²⁺ concentración para cada plantilla y cebador.

■ Diseño de cebador inadecuado y la secuencia objetivo tiene homología con la secuencia no objetivo. —— Rediseño de imprimaciones.

P: amplificación no específica

Fenómenos: Las bandas de amplificación por PCR no son coherentes con el tamaño esperado, ya sea grande o pequeño, o en ocasiones se producen tanto bandas de amplificación específicas como bandas de amplificación no específicas.

Imprimación A-1

■ Pobre especificidad del cebador

—— Imprimación de rediseño.

■ La concentración de imprimación es demasiado alta —— Aumente adecuadamente la temperatura de desnaturalización y prolongue el tiempo de desnaturalización.

A-2 Mg²⁺ concentración

■ El Mg²⁺ la concentración es demasiado alta —— Reduzca adecuadamente la concentración de Mg2 +: Optimice la concentración de Mg²⁺ concentración mediante una serie de reacciones de 1 mM a 3 mM con un intervalo de 0,5 mM para determinar el Mg óptimo²⁺ concentración para cada plantilla y cebador.

Polimerasa termoestable A-3

■ Cantidad excesiva de enzimas: reduzca la cantidad de enzimas de manera adecuada a intervalos de 0,5 U.

A-4 Temperatura de recocido

■ La temperatura de recocido es demasiado baja —— Aumente adecuadamente la temperatura de recocido o adopte el método de recocido de dos etapas

Ciclos de PCR A-5

■ Demasiados ciclos de PCR: reduzca el número de ciclos de PCR.

P: bandas parcheadas o manchadas

Imprimación A-1—— Escasa especificidad —— Rediseñe el cebador, cambie la posición y la longitud del cebador para mejorar su especificidad; o realizar una PCR anidada.

Plantilla de ADN A-2

——La plantilla no es pura ——Purifique la plantilla o extraiga el ADN con kits de purificación.

A-3 Mg²⁺ concentración

——Mg²⁺ la concentración es demasiado alta —— Reduzca adecuadamente el Mg²⁺ concentración: Optimice el Mg²⁺ concentración mediante una serie de reacciones de 1 mM a 3 mM con un intervalo de 0,5 mM para determinar el Mg óptimo²⁺ concentración para cada plantilla y cebador.

A-4 dNTP

——La concentración de dNTP es demasiado alta —— Reducir la concentración de dNTP de forma adecuada

A-5 Temperatura de recocido

——Temperatura de recocido demasiado baja —— Aumente adecuadamente la temperatura de recocido

Ciclos A-6

——Demasiados ciclos ——Optimizar el número de ciclo

P: ¿Cuánto ADN molde se debe agregar en un sistema de reacción de PCR de 50 μl?

P: ¿Cómo amplificar fragmentos largos?

El primer paso es elegir la polimerasa adecuada. La polimerasa Taq regular no se puede corregir debido a la falta de actividad exonucleasa 3'-5 ', y el desajuste reducirá en gran medida la eficacia de extensión de los fragmentos. Por lo tanto, la polimerasa Taq regular no puede amplificar eficazmente fragmentos diana mayores de 5 kb. Se debe seleccionar la polimerasa Taq con modificación especial u otra polimerasa de alta fidelidad para mejorar la eficiencia de extensión y satisfacer las necesidades de amplificación de fragmentos largos. Además, la amplificación de fragmentos largos también requiere el ajuste correspondiente del diseño del cebador, el tiempo de desnaturalización, el tiempo de extensión, el pH del tampón, etc. Normalmente, los cebadores con 18-24 pb pueden conducir a un mejor rendimiento. Para evitar daños en la plantilla, el tiempo de desnaturalización a 94 ° C debe reducirse a 30 segundos o menos por ciclo, y el tiempo para aumentar la temperatura a 94 ° C antes de la amplificación debe ser inferior a 1 min. Además, establecer la temperatura de extensión en aproximadamente 68 ° C y diseñar el tiempo de extensión de acuerdo con la velocidad de 1 kb / min puede garantizar una amplificación eficaz de fragmentos largos.

P: ¿Cómo mejorar la fidelidad de amplificación de la PCR?

La tasa de error de la amplificación por PCR se puede reducir utilizando varias ADN polimerasas con alta fidelidad. Entre todas las ADN polimerasas Taq encontradas hasta ahora, la enzima Pfu tiene la tasa de error más baja y la mayor fidelidad (ver tabla adjunta). Además de la selección de enzimas, los investigadores pueden reducir aún más la tasa de mutación de la PCR optimizando las condiciones de reacción, incluida la optimización de la composición del tampón, la concentración de polimerasa termoestable y la optimización del número de ciclos de PCR.

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