TGuide S96 Kit de ARN de sangre / células / tejidos

La lisis u homogeneización celular A-1 no es suficiente

---- Reduzca el uso de muestras, aumente la cantidad de tampón de lisis, aumente el tiempo de homogeneización y lisis.

A-2 La cantidad de muestra es demasiado grande

---- Reduzca la cantidad de muestra utilizada o aumente la cantidad de tampón de lisis.

A-1 Lisis u homogeneización celular insuficiente

---- Reduzca el uso de muestras, aumente la cantidad de tampón de lisis, aumente el tiempo de homogeneización y lisis.

A-2 La cantidad de muestra es demasiado grande

---- Consulte la capacidad máxima de procesamiento.

El ARN A-3 no se eluye completamente de la columna.

---- Después de agregar agua libre de ARNasa, déjela por unos minutos antes de centrifugar.

A-4 Etanol en el eluyente

---- Después del enjuague, centrifugue nuevamente y retire el tampón de lavado tanto como sea posible.

El medio de cultivo celular A-5 no se elimina por completo

---- Al recolectar células, asegúrese de eliminar el medio de cultivo tanto como sea posible.

A-6 Las células almacenadas en RNAstore no se centrifugan eficazmente

---- La densidad de almacenamiento de ARN es mayor que el medio de cultivo celular promedio; por lo que debe aumentarse la fuerza centrífuga. Se sugiere centrifugar a 3000x g.

A-7 Bajo contenido de ARN y abundancia en la muestra

---- Utilice una muestra positiva para determinar si el bajo rendimiento es causado por la muestra.

A-1 El material no es fresco

---- Los tejidos frescos deben almacenarse en nitrógeno líquido inmediatamente o colocarse inmediatamente en el reactivo RNAstore para asegurar el efecto de extracción.

A-2 La cantidad de muestra es demasiado grande

---- Reducir la cantidad de muestra.

Contaminación por ARNasa A-3n

---- Aunque el tampón provisto en el kit no contiene RNasa, es fácil contaminar la RNasa durante el proceso de extracción y debe manipularse con cuidado.

A-4 Contaminación por electroforesis

---- Reemplace el tampón de electroforesis y asegúrese de que los consumibles y el tampón de carga estén libres de contaminación por ARNasa.

A-5 Demasiada carga para electroforesis

---- Reduzca la cantidad de carga de muestra, la carga de cada pocillo no debe exceder los 2 μg.

A-1 La cantidad de muestra es demasiado grande

---- Reducir la cantidad de muestra.

A-2 Algunas muestras tienen un alto contenido de ADN y pueden tratarse con DNasa.

---- Realice un tratamiento con ADNasa sin ARNasa en la solución de ARN obtenida, y el ARN se puede usar directamente para experimentos posteriores después del tratamiento, o se puede purificar aún más mediante kits de purificación de ARN.

Para cristalería, horneado a 150 ° C durante 4 h. Para recipientes de plástico, sumergir en 0,5 M NaOH durante 10 min, luego enjuagar bien con agua libre de ARNasa y luego esterilizar para eliminar por completo la ARNasa. Los reactivos o soluciones utilizados en el experimento, especialmente el agua, deben estar libres de RNasa. Utilice agua libre de ARNasa para todas las preparaciones de reactivos (agregue agua a una botella de vidrio limpia, agregue DEPC a una concentración final de 0.1% (V / V), agite durante la noche y esterilice en autoclave).